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发表于 2009-1-12 15:38:45
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例13-1 一相对分子质量为80000的分子通过一根填有排阻极限为40 000的固定相的柱子,保留体积为25mL。另一足够小而能完全进入固定相孔内的低相对分子质量化合物的保留体积为 125mL。样品组分的保留体积为102mL,计算间隙体积V0,总孔容积Vi及样品组分的分配系数。
解 对相对分子质量为80000的化合物,KSEC=0,VR=V0=25ml;对低分子量化合物, VR=152ml,
KSEC=1,把这些数据代入式(13-5),计算Vi: VR=V0+KSECVi;152mL=25mL+Vi;Vi=127mL 将 VR、Vi和 VR=102ml,代人式(13-6)得样品分子的分配系数=
排阻色谱法中,保留时间是分子尺寸的函数,因此有可能提供分子结构的某些信息。它主要用来获得分散性聚合物的相对分子质量分布情况。但它不能分辨分子大小相近的化合物。一般说来,分子量的差别需在10%以上时才能得到分离,所以该法不能用于分离复杂的混合物。
二、排阻色谱的填料和流动相
排阻色谱分离的基础是不同分子大小的组分进人填料内孔深度的不同。因此,选择和搭配具有不同孔径,色谱性能良好的填料是很重要的,填料孔径大小应与试样分子量的大小相适应。
根据填料的来源不同,可分为有机和无机填料两大类。前者如交联聚苯乙烯凝胶,后者如多孔硅胶和多孔玻璃等。交联聚苯乙烯凝胶是目前使用最多的一种填料,用它装填的色谱柱渗透性好,柱效高,但不宜长期在高温条件下使用。硅胶、多孔玻璃等无机填料,耐高温、机械性能稳定,但它们的共同缺点是其表面的吸附物性,由于表面的剩余羟基产生的活性中心,对一些极性物质有吸附作用,因而扰乱了排阻色谱分离的机理,这就要求完全的化学硅烷化处理,以消除表面残留羟基的影响。
在排阻色谱中使用的流动相,仅仅作为试样的载体而不应与试样本身或填料有任何的相互作用,即不存在吸附或分配作用,以免出现假性分子量的保留值。此外,还要求能完全溶解试样,在分离温下粘度底,其沸点通常不柱温高20~50℃,与检测器匹配等。常用的流动相有:四氢呋喃、十氢化萘、氯仿、二甲基甲酰胺等。
三、应用
排阻色谱主要被用与分离大分子物质,其分离范围从相对分子质量2000~2000000之间,这些物质大多是生物化学物质和聚合物等。此外,排阻色谱越来越多的应用是通过测量相对分子质量分布来鉴定高聚物及研究高聚物聚合机理、聚合工艺、条件等。 |
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